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PCR实验室核酸气溶胶污染解决方案(终极版)
浏览次数:111 时间:2022-10-31

随着国内核酸检测实验室大量建立,每一轮疫情,PCR实验室都承担着巨量的 核酸检测任务,伴随着工作量的加大,实验室的核酸污染也成了困扰实验室工作人员的难题,核酸污染的后果就是容易出现假阳性,影响实验数据和防疫工作。

实验室的污染又分为:样本间交叉污染,PCR试剂的污染,克隆质料的污 染,PCR扩增产物的污染,有没有什么产品能够在短时间内在不影响实验室工 作的同时,又能完成对实验室核酸污染的降解目的呢?

作为一名长期奋战在检测工作的一线人员,还有我的同行们,一直希望有一种真实的核酸气溶胶污染解决方案,所以就有了下面的这个实验,这个实验方案我在网上也查找了一些相关资料,也同一些同行进行了交流,下面关于这个实验方案的介绍,与大家共同分享:

第一部分

1.1 样品

易护威牌核酸降解剂(配套核酸污染清除仪设备)

核酸清除设备:DAF-3000型, DAF-2000型,核酸降解剂型号:BRUMOXIM-2

进行核酸气溶胶污染的空气清除试验。

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1)试验舱的准备:开启净化10 min,调节温、湿度值。温度:20 ~ 30℃;湿度:45 ~ 55% RH

(2)《GB27948-2020 空气消毒剂通用要求》 :使用气溶胶喷雾消毒时,消毒剂用量应≤ 10 mL/m3。因此,将30 mL一定浓度的核酸降解剂加入到DAF-3000核酸污染清除仪中,将设备放入3 m3试验舱中,连接电源并设置好喷雾程序,待用(依据产品实际运行情况操作)。

3)试验样品的制备:在6支植绒棉签上各加20 μL ASFV基因质粒标准物质,固定在EP管架上待其风干。

4)将其中3支植绒棉签放置在室温下(不熏蒸)作为阳性对照,另3支植绒棉签固定在EP管架上放入试验舱中,关紧舱门。

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(5)通过橡胶手套按下消毒喷雾设备的启动键,待喷雾结束后开始计时。
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6qPCR预混液的制备与分装(地点:病毒室)

1.5 mLRNAEP管中制备包含除样本外的所有qPCR反应组分的预混液,振荡混匀后,用小型离心机离心5 s后分装各13 μL8联管孔中(标准品单独使用一列8联管),盖好备用。

7)静置密闭2 h后,通过传递舱将试验组的3支植绒棉签取出,开启净化30 min

8)将每只植绒棉签在1.5 mL EP管中各自用1000 μL TE缓冲液进行洗脱,然后取200 μL进行核酸提取。

9)进行Probe qPCR反应。

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10)等qPCR扩增反应完成后,记录数据,比较熏蒸组与不熏蒸组之间的拷贝浓度,判断核酸降解剂的核酸气溶胶污染的空气清除效果。

核酸气溶胶污染的空气清除效率 = (熏蒸前的质粒浓度 - 熏蒸后剩余质粒浓度)/ 熏蒸前的质粒浓度

最后得到的数据曲线图为

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最后得到的数据显示,关于核酸降解这个问题,还是有办法去解决的,然后根据相同的实验过程,我们的核酸污染重灾区生物安全柜的效果如何呢,我们又使用DAF-2000型在生物安全柜内进行整套实验,取得的实验效果也是一致的。
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在整个实验的过程中要感谢我的同事们,在过程中对我的协助,整个实验一个人无法完成的,也要感谢(核酸清除设备和核酸降解剂的提供商)易护威环保科技(深圳)有限公司提供核酸降解仪及新上市的核酸降解剂,没有这些,我们整个实验是无法达到最佳的效果,也要感谢对实验方案提供大量意见的我的同行们,希望对大家今后的检测工作有帮助。


                                                                     本文作者:实验室小兵

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